血漿中兒茶酚胺的LC-MS/MS分析方法
檢測(cè)背景
兒茶酚胺是一種含有兒茶酚和胺基的神經(jīng)類(lèi)物質(zhì)。兒茶酚胺（CA）包括去甲腎上腺素（NA或NE）、腎上腺素(Ad或E)和多巴胺（DA）及它們的衍生物。兒茶酚胺類(lèi)物質(zhì)在體內(nèi)調(diào)節(jié)基本生理功能，傳遞生理信號(hào)，是正常生理過(guò)程中重要的信號(hào)介質(zhì)，同時(shí)在病理過(guò)程中也出現(xiàn)其含量的相應(yīng)變化。臨床上可以用于輔助診斷高血壓、甲亢、嗜鉻細(xì)胞瘤和神經(jīng)母細(xì)胞瘤等內(nèi)分泌相關(guān)疾病。血漿里兒茶酚胺水平的變化顯示不同的病態(tài)情形，因此也被用于多種臨床應(yīng)用檢測(cè)項(xiàng)目中。本次應(yīng)用，我們將向您介紹血漿中兒茶酚胺的LC-MS/MS分析方法。
樣品制備
固相萃取（SPE）
小柱：Cleanert® PWCX
貨號(hào)：WC00201-MW
活化：先用 200 μL 甲醇活化，再用 200 μL 50 mM 乙酸銨活化，控制流速 3-5s/滴。
上樣：把預(yù)處理的樣品分兩次上樣，每次 500 μL，施加正壓全部壓下，控制流速 3-5s/滴。（500 μL 人血混合液+10 μL 0.1%甲酸乙腈 +10 μL 內(nèi)標(biāo)+500 μL 50 mM 醋酸銨溶液，混勻。）
淋洗 1：向每孔加入500 μL乙腈，正壓壓下，控制流速 3-5s/滴，棄去。
淋洗 2：向每孔加入500 μL水，正壓壓下，控制流速 3-5s/滴，棄去，然后施加 0.5MPa 壓力壓 1min。（不同的正壓裝置壓力強(qiáng)度不同，壓力的設(shè)定會(huì)隨之改變，唯一不變的是盡可能 的保證柱床中不能有太多水分）
洗脫：向每孔中加入100 μL 2%FA乙腈，正壓壓下，控制流速3-5s/滴，收集。
氮吹：將收集的洗脫液在室溫下氮吹干
復(fù)溶：用60 μL流動(dòng)相復(fù)溶，渦旋30s，蓋上硅膠墊進(jìn)樣檢測(cè)
LC-MS/MS條件
色譜柱：兒茶酚胺專(zhuān)用柱 3 µm
規(guī)格：2.1 × 100 mm
貨號(hào)：VSI931002-A
流動(dòng)相：
A：0.1%甲酸-10mM甲酸銨水；
B：0.1%甲酸-10%水-10mM甲酸銨-90%乙腈
梯度：
流速：0.6mL/min
柱溫：40 ℃
進(jìn)樣量：10uL
圖1.500pg/ml 多巴胺標(biāo)準(zhǔn)品出峰譜圖
圖2.1ng/ml 去甲腎上腺素標(biāo)準(zhǔn)品出峰譜圖
圖3.500pg/ml 腎上腺素標(biāo)準(zhǔn)品出峰譜圖
圖4.500pg/ml 去甲變腎上腺素標(biāo)準(zhǔn)品出峰譜圖
圖5.50pg/ml 甲氧酪胺標(biāo)準(zhǔn)品出峰譜圖
圖6.50pg/ml 變腎上腺素標(biāo)準(zhǔn)品出峰譜圖
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
血漿樣品加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果（添加水平 pg/mL）
